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在用国标法测定牛乳中的蛋白质时，采用多孔井式电加热炉对牛乳样品进行消化，在加入适量廉价的催化剂后，将消化炉的电压调至220v 时，消化一份牛乳样品仅需 100～105min。试验结果表明，本方法具有精密（变异系数=0.62%）、准确、稳定、简单、快速、安全等优点，可以满足批量样品的检测需要，下面一起学习一下利用全自动定氮仪测量牛乳中蛋白质的含量。
蛋白质是复杂的含氮有机化合物，主要是由各种氨基酸构成。它是牛乳的重要组成成分，亦是重要的营养物质。蛋白质的法定测定方法，以凯达尔氏发明的定氮法为基础，根据各种蛋白质皆各有固定比数的氮这一事实，通过对氨的测定而推算出蛋白质含量，此法所得的含氮量除了确实属于蛋白质组成成分的氮以外，还包括非蛋白质组成的其他有机及无机态氮，所以换算所得的蛋白质含量称作为粗蛋白含量。蛋白质测定仪就是利用这一经典的测定蛋白质含量的方法研发制成，所得结果准确、稳定，但测定时间较长，一般一份样品至少需要6～8h 始得结果。本文采用井式电加热炉，增大消化管的受热面积，使消化管内的试样及浓H2SO4在井式电加热炉内取得最大的热效应，同时在消化前置入适宜的廉价催化剂，从而大大缩短了消化时间。
本文采用的方法能对牛乳中的蛋白质进行快速测定。牛乳中的蛋白质是含氮的有机化合物，样品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵，然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量计算出氮的含量，再乘以换算系数即得蛋白质含量。
仪器设备与试剂：KDN—08A定氮仪（浙江托普仪器有限公司）；电子分析天平；硫酸（H2SO4，分析纯，比重1.84）；硫酸铜（CuSO45H2O，分析纯）；硫酸钾（K2SO4，分析纯）；40%氢氧化钠（NaOH）；2%硼酸（H3BO3）；1mol/L 盐酸（HCl）；混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液+0.5%溴甲酚绿乙醇溶液（1∶ 1 ）。
样品处理：精确称取样品5.0g于消化管中，加入0.5gCuSO45H2O、5.0gK2SO4，再沿消化管壁徐徐加入10mlH2SO4（比重1.84），并轻轻摇荡，使样品全部被脱水炭化。
消化：将消化管分别放入消化架各个孔内，然后置于消化炉上，并立即开启抽吸泵水阀，使抽吸泵处于吸气状态。接通电源，在加热初始阶段，须注意观测，防止试样因急沸而飞溅（初化时，电压调至180～190v）。待泡沫停止后，将电压调至220v，消化100～105min后冷却。
蒸馏：
①在250ml 三角接受瓶中加入2%H3BO3 50ml 和2～3滴混合指示剂，将此瓶套在蒸馏器的接收管上，并且让管口浸没在H3BO3溶液中。
②在冷却后的消化管中加入 50～80ml 蒸馏水，40～50ml 40%NaOH 溶液。
③扳动蒸馏托盘架把需要蒸馏的消化管固定在托盘架上，然后开启蒸汽开关，向消化管内注入蒸汽，进行蒸馏。待接受瓶液面高于 150ml 刻度时，将接受瓶下移，使接受瓶离开液面。继续蒸馏半分钟，用蒸馏水洗瓶冲洗出气口，然后取下接受瓶，待滴定之用。滴定用 0.1mol/LHCl 标准溶液滴定接受瓶内的溶液，滴定溶液由绿色变成淡紫色时为止。记下消耗 HCl 的毫升数。
结果计算：
测定结果：
在消化管中加入供试样品 5.0g，然后按照上述分析步骤进行测定（一次可以消化 8 个样品），结果如表所示：
结论：
在用半微量凯氏定氮法测定牛乳中蛋白质的含量时，采用多孔井式电加热炉，并在消化前置入适宜的廉价催化剂，对牛乳样品进行消化，极大地提高了消化样品的热效应，同时将消化时间亦缩短了很多。牛乳蛋白质中含有7.1%（质量分数）的赖氨酸和2.6%（质量分数）的组氨酸，这两种氨基酸中的氮在短时间内不易消化完全，往往导致总氮量偏低。消化时间过长会引起氨的损失。用本法测定牛乳中的蛋白质，消化一个样品的时间为100～105min，变异系数为0.62%。本方法所得结果精密、准确、稳定、简单、快速、安全，可以满足批量样品的检测需要。 |
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