对黄曲霉毒素生物合成过程中的相关基因的表达情况进行了研究 生物, 黄曲霉菌, 致癌物质, 农作物

topyq2003

　黄曲霉毒素是由黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生的次生代谢产物，是国际肿瘤研究机构（IARC）界定的 IA 类强致癌物质，广泛地污染粮食、谷类、油料、调味品等农作物。由于生物控制和实验室检测是黄曲霉毒素污染控制体系的关键环节, 本文以中国出口敏感农产品为研究对象，利用黄曲霉素测定仪对黄曲霉素进行测量，对黄曲霉毒素的生物积累及其检测技术质量控制标准体系进行了研究。本文以黄曲霉和寄生曲霉标准菌株以及从花生、土壤样品中分离出来的野生菌株为研究对象，选择在不同的培养条件下（接种量、无机盐、温度、pH 值、氧气等），菌株液体发酵液的产毒情况，通过正交实验的方法确定了产毒菌株最适生长条件和产毒最低条件。研究发现，通过控制改变储藏环境条件来控制产毒菌的产毒是一个高效易行的方法。较低的温度和良好的通风，即一个凉爽干燥的储藏环境，加上弱碱性的条件可以很好的降低毒素的产量。
　　本研究采用 RT-PCR 方法，对黄曲霉毒素生物合成过程中的相关基因的表达情况进行了研究，在基因表达水平上探索了黄曲霉毒素产生的规律。研究发现 aflO、aflD、aflP 三个基因的表达与菌株是否产毒直接相关，与 HPLC 法检测黄曲霉毒素的结果一致。RT-PCR 技术可用来鉴定菌株是否产毒。在上述实验的基础上，从我国的土壤和花生样品中筛选出不产毒的黄曲霉菌株，通过紫外诱变筛选出生长力强的不产毒黄曲霉菌株 A1025 作为拮抗菌株，该菌株经过 5 代传代培养后仍不产生毒素，具有较好的稳定性；当拮抗菌的孢子浓度为 10%时，发酵液中已检测不到黄曲霉毒素；将拮抗菌以不同的抑制浓度接种在花生等农产品中，发现该拮抗菌株能够有效降低黄曲霉毒素的生成，对照组黄曲霉毒素的含量为 89.5 ppb，接种10%拮抗菌孢子实验组黄曲霉毒素含量为 1.26 ppb，当接种量达到 15%时，已检测不到黄曲霉毒素。研究表明，A1025 对黄曲霉毒素的产生具有有效的抑制作用，在花生等农作物的模拟实验中能够有效地抑制黄曲霉毒素的产生。
　　黄曲霉毒素检测技术的质量控制标准体系的研究本研究针对世界贸易技术壁垒的严峻挑战，从黄曲霉素测定仪测量方法验证、质量控制、不确定度评定、国际协作实验研究和能力评估体系研究等几个方面，对实验室黄曲霉毒素的分析检测质量控制体系进行了研究，以满足国际限量规定及我国出口农产品的贸易技术需求。
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