|
- UID
- 881562
|
分析超速离心机的另一重要用途是测定大分子的分子量。
分析超速离心机运转的速度范围很大，使它可能测定小到蔗糖大到病毒的分子量值。它也可以测定多分散性大分子的平均分子量和分子量分布。
分析超速离心测定的是分子的绝对分子量，它不需要任何标准样品作参考，亦不需要知道样品分子的 形状和水化程度。通常使用的有两种方法，即沉降速度法和沉降平衡法。
沉降速度法是最早使用的方法，目前已被沉降平衡法所代替。但沉降扩散法仍然应用于某些特殊样品的分子量测定，如多组分样品，用沉降平衡法无法测定，而沉降扩散法可以根据各组分的沉降峰，求出相应的沉降系数，再结合扩散系数求算各别的分子量。
沉降速度法还可用于测定某些分子量特别大的分子如染色体DNA的分子量。沉降速度法是根据Svedberg方程计算分子量的。主要测定数据有沉降系数，扩散系数和偏微比容。严格讲Svedberg方程式只适用于双组分，无限稀，没有电荷效应的理想溶液。实际测定时在样品液中加入适量中性盐及缓冲离子来减小电荷效应。沉降系数和扩散系数应该测定于不同样品浓度然后由浓度外推法求算S020及D020值，才能得到正确的分子量值。偏微比容通常测定的是无水化情况的值，所以求得的分子量刀是无水化的分子量值。通常亦可用近似方法，由于沉降系数和扩散系数的浓度依赖关系很相似，所以S/D的比值随浓度改变不大，因此可以在相同浓度条件下测定沉降系数和扩散系数，从而计算出近似的但是仍相当可靠的表观分子量值粗蛋白测定仪。
沉降平衡法的基本原理是样品溶液在分析池中经低速长时间离心，分析池内样品浓度分布达到热力学平衡时，根据分析池内样品的浓度分布可以求算分子量。这种热力学平衡态只有在无限长时间才能达到。实际实验时的达到平衡是指用光学系统已测不到分析池内样品浓度分布的变化的时间。
沉降平衡法测定分子量的主要优点是：(1)它有一个很好的热力学理论基础，只要很少的假设就可以用于实际测定。(2)计算时不要扩散系数，通常扩散系数测量误差较大，故而沉降平衡法比沉降扩散法简便而精确。比较测色仪
沉降平衡法的主要缺点是：离心时间太长，通常要几十小时离心。对于多分散性样品，及在含高盐和变性剂的溶液中测量，沉降平衡法特别优越。沉降平衡法通常测定单组分纯样品，如果含有小分子杂质应该对溶剂透析后才可测定。样品如果是多分散性的，实验结果是其平均分子量。对于聚合解离反应的样品，可以得到不同浓度点的平均分子量。
粮油仪器在线 www.grain17.com
植保仪器网 www.zhibao17.com
种子仪器网 www.seed17.net |
|
